Применение мультиплексных методов позволяет также качественно улучшить раннюю диагностику, по возможности, на доклинической стадии. Перспективы иммунодиагностики РЗ связаны с необходимостью стандартизации и гармонизации недавно разработанных лабораторных тестов на международном уровне, а также поиском новых доказательных биомаркеров на основе протеомных, транскриптомных и генетических инновационных технологий. Следует отметить, что именно мультиплексный анализ выявляет и дифференцирует аутоантитела к ядерным и цитоплазматическим антигенам (dsDNA, Sm, SSA/Ro, Scl-70, Jo-1, РНП). Антинуклеарные антитела представлены группой аутоантител, реагирующих с различными компонентами ядра, и в реакции иммунофлуоресценции их обознают как антинуклеарный фактор (АНФ). При получении положительных реакций на АНА требуется использовать подтверждающие тесты, такие как иммуноферментный анализ, иммуноблоттинг, а также определение специфических АТ к отдельным факторам АНА. Положительные результаты определения АНФ рассматриваются в качестве обязательных диагностических критериев для лекарственной волчанки, смешанных заболеваний соединительной ткани, аутоиммунного гепатита; для оценки прогноза и мониторинга ювенильного хронического артрита и феномена
Среди суспензионных мультиплексных методик наибольшее распространение получила технология х-МАР с использованием проточной цитометрии, и микросферами из полистерола, маркированных красными и инфракрасными флуорофорами и лазерной детекцией. Микросферы, имеющие диаметр 5.6 мкм, обладают уникальными спектральными характеристиками, что позволяет измерить до 100 аналитов в одном образце. Клиническое значение мультиплексного анализа состоит в том, что чувствительность и специфичность его в 2-3 раза выше по сравнению с ИФА. Протеомный анализ аутоантител в сыворотках крови больных ревматоидным артритом выявил наличие клиниколабораторных субтипов данного заболевания. Первый из них характеризуется аутореактивным В-клеточным ответом к цитрулиновым эпитопам, ассоциирующихся с серопозитивностью по РФ, высокой концентрацией СРБ, носительством SE, выраженным снижением функциональной активности и тяжелым прогрессирующим течением заболевания. Второй субтип характеризуется ареактивностью в отношении нативных эпитопов, и является предиктором более благоприятного прогноза. Следует отметить, что мультиплексный анализ биомаркеров РЗ при использовании технологии биочипов на 12 цитокинов и факторов роста является важным для оценки эффективности персонифицированной терапии с использованием генно-инженерных биологических биопрепаратов (ГИБП).
Мультиплексный анализ – принципиально новый уровень лабораторной диагностики в ревматологии, позволяющий проводить одновременное тестирование множества аутоантител и других аналитов в одном образце крови пациента (несколько микролитров) с сокращением времени на исследование (по сравнению с последовательным определением аутоантител и другие). Наряду с ДНК- и белковыми биочипами разработаны тканевые и клеточные микрочипы, а также жидкостные биосенсорные аналитические устройства. Планарные микрочипы – мультиплексные аналитические системы на основе упорядоченного размещения и иммобилизации ДНК и белков (аутоантигенов) на плоской твердой подложке в виде микропятен на слайд – пластинках, в лунках полистероловых микроплат, на нитроцеллюлезной мембране, либо в виде линейного иммуноблотта и регистрацией сигналов методами колориметрии, иммунофлуоресценции, хемилюминесценции и масс-спектрометрии.
Значительный прогресс в оценке диагностического и прогностического значения аутоантител и других биологических маркеров достигнут благодаря внедрению в клиническую практику стандартных иммунологических методов исследования. Развитие лигандных методов иммуноанализа с использованием ферментных, флуоресцентных, и люминесцентных меток; получение высокоочищенных аутоантигенов и моноклональных антител; появление высокотехнологичных анализаторов; внедрение информационных программ – все это позволило повысить значительно диагностическую специфичность и чувствительность и расширить спектр биомаркеров. Кроме того, успехи геномики и протеомики последнего десятилетия с применением высокопроизводительных многопараметрических методов исследования и миниатюризированных диагностических платформ, в том числе, полимеразной цепной реакции (ПЦР), ДНК- и белковых микрочипов, способствовали созданию мультиплексных биоаналитических технологий для диагностики РЗ.
Кроме того, важным фактором патогенеза ревматоидных заболеваний является дисрегуляция нормального цитокинового баланса. В настоящее время, выделяют три группы цитокинзависимых иммуновоспалительных ревматоидных заболеваний (РЗ) с преимущественной гиперпродукцией: фактора некроза опухолей (ФНО- а), интерлейкинов ИЛ-1 или интерлейкинов-6, развитие которых связано с нарушениями Т-клеточной иммунорегуляции. Эти факторы целесообразно использовать как для ранней диагностики и оценки прогноза иммуновоспалительных РЗ, так и для оптимального назначения биологических препаратов, ингибирующих функциональную активность доминантных цитокинов.
Характерной особенностью аутоиммунных болезней является одновременное присутствие в сыворотке крови больного нескольких типов аутоантител с различной специфичностью, так называемого профиля аутоантител. В связи с этим в последние годы разработаны специальные профили аутоантител: для системной красной волчанки (АНА, анДНК, aRO/SS-A, aLA/SS-B,aPHП, aKL, aCIq); ревматоидного артрита (IgM/IgA РФ, антитела к цитруллинированным белкам пептиду и виментину и другие); антифосфолипидного синдрома (IgG/IgM akl, IgG/IgMab2-ГПI, ВА); системной склеродермии (aScl, антицентромерные и антинуклеолярные антитела); дерматомиозита и полимиозита (антитела к аминосинтетазам т-РНК).
Особое место в лабораторной диагностике ревматоидных заболеваний занимают серологические тесты, связанные с обнаружением циркулирующих аутоантител. Основными диагностическими маркерами являются антинуклеарные антитела (AHA), ревматоидный фактор (РФ), антитела к циклическому цитруллированному пептиду (АЦЦП), антифосфолипидные антитела (АФЛ), и антинейтрофильные цитоплазматические антитела (АНЦА).
Клиническая информативность лабораторных исследований (т.е. критерий доказательной медицины) определяется путем расчета операционных характеристик теста – диагностической чувствительности и специфичности, предсказательной ценности положительных и отрицательных результатов, отношения правдоподобия положительных (ОППР) и отрицательных (ОПОР) результатов. Согласно международным рекомендациям, наиболее полезными для диагностики являются лабораторные тесты с ОППР> 5 и ОПОР< 0,2.
Системные заболевания соединительной ткани (аутоиммунный процесс) – группа заболеваний, характеризующихся системным типом воспаления различных органов и систем, сочетающихся с развитием аутоиммунных и иммунокомплексных процессов. В эту группу аутоиммунных заболеваний включено более 100 нозологических форм. Наиболее широко распространенными и изученными являются ревматические болезни. К ним относят ревматоидный артрит, системную красную волчанку, системную склеродермию, синдром Шегрена, системные васкулиты, антифосфолипидный синдром, дерматомиозит, полимиозит и другие. В настоящее время считают, что патогенез ревматоидных болезней наряду с аутоиммунитетом и аутовоспалением, имеет связь с генетически детерминированными и индуцированными факторами внешней среды (инфекции, курение, стресс и др.), дефектами активации приобретенного и врожденного иммунного ответа. Прогноз при аутоиммунных ревматоидных заболеваниях во многом зависит от возможностей ранней диагностики, которая позволит провести активную противовоспалительную терапию в дебюте болезни. Современная лабораторная диагностика ревматоидных заболеваний включает определение широкого спектра биомаркеров, таких как аутоантитела, белки острой фазы воспаления, цитокины, маркеры повреждения эндотелия, компоненты системы комплемента, иммуноглобулины, криоглобулины, субпопуляции лимфоцитов, показателей костного метаболизма, маркеров апоптоза, генетических маркеров и другие. Лабораторные тесты, применяемые в ревматологии, позволяют получить объективную информацию о характере иммунопатологических нарушений, и являются важными для диагностики, оценки активности процесса, тяжести течения, прогноза, и эффективности терапии.
Аутоиммунные процессы могут быть связанны с «молекулярной мимикрией» (сходством аутоантигенов с антигенами возбудителей некоторых инфекционных заболеваний). Важную роль в развитии этих заболеваний играет генетическая предрасположенность и гормональный фон. Повреждение тканей при аутоиммунной патологии опосредуются антителами, иммунными комплексами, активированными лимфоцитами и макрофагами. Определение аутоантител используют как маркеры в лабораторной диагностике аутоиммунных заболеваний.
Аутоиммунные заболевания – это повреждение тканей или нарушения физиологических функций, вызванные аутоиммунным ответом (иммунным ответом организма, направленным против собственных антигенов). В процесс вовлекаются аутоантигены, имеющиеся в организме, и развитие получают системные повреждения или процесс ограничивается повреждением одного органа (например, эндокринная железа). Иммунная система в норме нереактивна (толерантна) к собственным антигенам, а аутоиммунные заболевания возникают только тогда, когда толерантность снижается. Механизмы нарушения толерантности к аутоантигенам связывают с изменениями экспрессии собственных антигенов, вызванными воспалением или повреждением тканей, воздействием вирусов, свободных радикалов или ионизирующей радиации, некоторыми лекарственными препаратами.
Не разрешается копировать, перепечатывать, переиздавать.
© ООО "АстроМЕД"
г. Ростов-на-Дону, 2012г.
Нарушения метаболизма и восполительные процессы.
Справочное пособие для врачей.
Лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний
» » » Лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний
Лабораторная диагностика аутоиммунных заболеваний - АстроМЕД - Все для диагностических лабораторий!
Комментариев нет:
Отправить комментарий